中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫局 2002－03－05發(fā)布 | 2002 －09－01實施 | ||
中華人民共和國國家標準 |
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一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準 | GB 15979 －2002 | ||
Hygienic standard for disposable sanitary products | 代替 GB 15979-1995 | ||
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（接上頁） 附 錄
（標準的附錄）
產品環(huán)氧乙烷殘留量測試方法
D1
測試目的確定產品消毒后啟用時間，當新產品或原材料、消毒工藝改變可能影響產品理化性能時應予測試。
D2
樣品采集環(huán)氧乙烷消毒后，立即從同一消毒批號的三個大包裝中隨機抽取一定量小包裝樣品，采樣量至少應滿足規(guī)定所需測定次數(shù)的量(留一定量在必要時進行復測用)。
分別于環(huán)氧乙烷消毒后24 h及以后每隔數(shù)天進行殘留量測定，直至殘留量降至本標準4.6所規(guī)定的標準值以下。
D3
儀器與操作條件儀器：氣相色譜儀，氫焰檢測器(FID)。
柱：Chromosorb 101 HP60～80目；玻璃柱長2m，φ 3 mm。柱溫：120℃。
檢測器：150℃。
氣化器：150℃。
載氣量：氮氣：35 mL/min。
氫氣：35 mL/min。
空氣：350 mL/min。
柱前壓約為108 kPa。
D4
操作步驟D4.1 標準配制
用100 mL玻璃針筒從純環(huán)氧乙烷小鋼瓶中抽取環(huán)氧乙烷標準氣(重復放空二次，以排除原有空氣)，塞上橡皮頭，用10 mL針筒抽取上述100 mL針筒中純環(huán)氧乙烷標準氣10 mL，用氮氣稀釋到100 mL(可將10 mL標準氣注入到已有90 mL氮氣的帶橡皮塞頭的針筒中來完成)。用同樣的方法根據(jù)需要再逐級稀釋2～3次(稀釋1 000～10 000倍)，作三個濃度的標準氣體。按環(huán)氧乙烷小鋼瓶中環(huán)氧乙烷的純度、稀釋倍數(shù)和室溫計算出zui后標準氣中的環(huán)氧乙烷濃度。
計算公式如下：
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| 44 ×106 |
| 273 |
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c | = |
| × |
| ....(D1) |
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| 22.4 ×103×k |
| 273+t |
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式中：c―― 標準氣體濃度，
μg/mL；k―― 稀釋倍數(shù)；
t―― 室溫，℃。
D4.2 樣品處理
至少取2個zui小包裝產品，將其剪碎，隨機稱取2 g，放入萃取容器中，加入5 mL去離子水，充分搖勻，放置4h或振蕩30 min待用。如被檢樣品為吸水樹脂材料產品，可適當增加去離子水量，以確保至少可吸出2mL樣液。
D4.3 分析
待儀器穩(wěn)定后，在同樣條件下，環(huán)氧乙烷標準氣體各進樣1.0 mL，待分析樣品（水溶液）各進樣2
μL，每一樣液平行作2次測定。根據(jù)保留時間定性，根據(jù)峰面積(或峰高)進行定量計算，取平均值。
D4.4 計算
以所進環(huán)氧乙烷標準氣的微克(μg)數(shù)對所得峰面積(或峰高)作環(huán)氧乙烷工作曲線。
以樣品中環(huán)氧乙烷所對應的峰面積(或峰高)在工作曲線上求得環(huán)氧乙烷的量A(μg)，并以式(D2)求得產品中環(huán)氧乙烷的殘留量。
| A |
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X= |
| ．．．（D2） | |
| M |
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| ×V（進） |
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| V(萃) |
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式中：X--產品中環(huán)氧乙烷殘留量，
μg/g；A――從工作曲線中所查得之環(huán)氧乙烷量，μg；
M――所取樣品量，g；
V(萃)――萃取液體積，mL；
V(進)――進樣量，mL。
附 錄 E
（標準的附錄）
生產環(huán)境采樣與測試方法
E1
空氣采樣與測試方法E1.1 樣品采集
在動態(tài)下進行。
室內面積不超過30 m2，在對角線上設里、中、外三點，里、外點位置距墻1 m；室內面積超過30 m2，設東、西、南、北、中5點，周圍4點距墻1 m。
采樣時，將含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9 cm)置采樣點(約桌面高度)，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。
E1.2 細菌培養(yǎng)
在采樣前將準備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基置35℃±2℃ 培養(yǎng)24 h，取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。
將已采集的培養(yǎng)基在6 h內送實驗室，于35℃±2℃ 培養(yǎng)48h觀察結果，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。
E1.3 菌落計算
y1= | A×50 000 | ．．．（E1） |
S1×t |
式中：y1――空氣中細菌菌落總數(shù)，cfu/m3;
A――平板上平均細菌菌落數(shù)；
S1――平板面積，cm2;
t--暴露時間，min。
E2
工作臺表面與工人手表面采樣與測試方法E2.1 樣品采集
工作臺：將經(jīng)滅菌的內徑為5cm×5cm的滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用一浸有滅菌生理鹽水的棉簽在其內涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。
工人手：被檢人五指并攏，用一浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。
E2.2 細菌菌落總數(shù)檢測
將已采集的樣品在6h內送實驗室，每支采樣管充分混勻后取1mL樣液，放入滅菌平皿內，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個樣品平行接種兩塊平皿，置35℃±2℃ 培養(yǎng)48 h，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。
y2= | A | ×10．．．（E2） |
S2 |
y3= | A | ×10．．．（E3） |
S3 |
式中：y2――工作臺表面細菌菌落總數(shù)，cfu/cm2;
A――平板上平均細菌菌落數(shù)；
S2――平板面積，cm2;
y3--工人手表面細菌菌落總數(shù)，cfu/只手。
E2.3 致病菌檢測
按本標準附錄B進行。
附 錄 F
（標準的附錄）
消毒效果生物監(jiān)測評價方法
F1
環(huán)氧乙烷消毒F1.1 環(huán)氧乙烷消毒效果評價用生物指示菌為枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC 9372)。在菌量為5×105～5×106cfu/片，環(huán)氧乙烷濃度為600mg/L
±30mg/L，作用溫度為54±2℃，相對濕度為60％±10％條件下，其滅殺90％微生物所需時間D值應為2.5～5.8 min，存活時間≥7.5 min，殺滅時間≤58 min。F1.2 每次測試至少布放10片生物指示劑，放于zui難殺滅處。消毒完畢，取出指示菌片接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作定量檢測，將未處理陽性對照菌片作相同接種，兩者均置35℃±2℃ 培養(yǎng)。陽性對照應在24 h內有菌生長。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7天全部無菌生長，可報告生物指示劑培養(yǎng)陰性，消毒合格。定量培養(yǎng)樣品與陽性對照相比滅活指數(shù)達到103也可報告消毒合格。
F2
電離輻射消毒F2.1電離輻射消毒效果評價用生物指示菌為短小桿菌芽胞E601(ATCC 27142)，在菌量為5×105～5
×106 cfu/片時，其殺滅90％微生物所需劑量D10值應為1.7kGy。F2.2 每次測試至少選5箱，每箱產品布放3片生物指示劑，置zui小劑量處。消毒完畢，取出指示菌片接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作定量檢測，將未處理陽性對照菌片作相同接種，兩者均置35℃±2℃培養(yǎng)。陽性對照應在24 h內有菌生長。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7天全部無菌生長，可報告生物指示劑培養(yǎng)陰性，消毒合格。定量培養(yǎng)樣品與陽性對照相比滅活指數(shù)達到103也可報告消毒合格。
F3
壓力蒸汽消毒參照GB15981－1995規(guī)定執(zhí)行。
附 錄 G
（標準的附錄）
培養(yǎng)基與試劑制備
G1
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：
| 蛋白胨 | 10g |
| 牛肉膏 | 3g |
| 氯化鈉 | 5g |
| 瓊脂 | 15g～20g |
| 蒸餾水 | 1 000mL |
制法：除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中，調pH至7.2～7.4，加入瓊脂，加熱溶解，分裝試管，121℃滅菌15min后備用。
G2
乳糖膽鹽發(fā)酵管成分：
| 蛋白胨 | 20 g |
| 豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) | 5 g |
| 乳糖 | 10 g |
| 0.04％溴甲酚紫水溶液 | 25 mL |
| 蒸餾水 | 加至1 000 mL |
制法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH至7.4，加入指示劑，分裝每管50 mL，并放入一個小倒管，115℃滅菌15 min，即得。
G3
乳糖發(fā)酵管成分：
| 蛋白胨 | 20 g |
| 乳糖 | 10 g |
| 0.04％溴甲酚紫水溶液 | 25 mL |
| 蒸餾水 | 加至1 000 mL |
制法：將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH至7.4，加入指示劑，分裝每管10 mL，并放入一個小倒管，115℃滅菌15 min，即得。
G4
伊紅美藍瓊脂(EMB)成分：
| 蛋白胨 | 10 g |
| 乳糖 | 10 g |
| 磷酸氫二鉀 | 2 g |
| 瓊脂 | 17 g |
| 2％伊紅Y溶液 | 20 mL |
| 0.65％美藍溶液 | 10 mL |
| 蒸餾水 | 加至1 000 mL |
制法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正pH至7.1，分裝于燒瓶內，121℃滅菌15 min備用，臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至55℃，加入伊紅和美藍溶液搖勻，傾注平板。
G5 SCDLP
液體培養(yǎng)基成分：
| 酪蛋白胨 | 17 g |
| 大豆蛋白胨 | 3 g |
| 氯化鈉 | 5 g |
| 磷酸氫二鉀 | 2.5 g |
| 葡萄糖 | 2.5 g |
| 卵磷脂 | 1 g |
| 吐溫80 | 7 g |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
制法：將各種成分混合(如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替)，加熱溶解，調pH至7.2～7.3，分裝，121℃滅菌20min，搖勻，避免吐溫80沉于底部，冷至25℃后使用。
G6
十六烷*基溴化銨培養(yǎng)基成分：
| 牛肉膏 | 3 g |
| 蛋白胨 | 10 g |
| 氯化鈉 | 5 g |
| 十六烷*基溴銨 | 0.3 g |
| 瓊脂 | 20 g |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
制法：除瓊脂外，上述各成分混合加熱溶解，調pH至7.4～7.6，然后加入瓊脂，115℃滅菌20 min，冷至55℃左右傾注平皿。
G7
綠膿菌素測定用培養(yǎng)基斜面成分：
| 蛋白胨 | 20 g |
| 氯化鎂 | 1.4 g |
| 硫酸鉀 | 10 g |
| 瓊脂 | 18 g |
| 甘油(化學純) | 10g |
| 蒸餾水 | 加至1 000 mL |
制法：將蛋白胨、氯化鎂和硫酸鉀加到蒸餾水中，加熱溶解，調pH至7.4，加入瓊脂和甘油，加熱溶解，分裝試管，115℃滅菌20 min，制成斜面?zhèn)溆谩?/P>
G8
明膠培養(yǎng)基成分：
| 牛肉膏 | 3 g |
| 蛋白胨 | 5 g |
| 明膠 | 120 g |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
制法：各成分加入蒸餾水中浸泡20 min，加熱攪拌溶解，調pH至7.4，5 mL分裝試管中，115℃ 滅菌20 min，直立制成高層備用。
G9
硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基成分：
| 蛋白胨 | 10 g |
| 酵母浸膏 | 3 g |
| 硝酸鉀 | 2 g |
| 亞硝酸鈉 | 0.5 g |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
制法：將蛋白胨與酵母浸膏加到蒸餾水中，加熱溶解，調pH至7.2，煮沸過濾后補足液量，加入硝酸鉀和亞硝酸鈉溶解均勻，分裝到有小倒管的試管中，115℃滅菌20 min備用。
G10
血瓊脂培養(yǎng)基成分：
| 營養(yǎng)瓊脂 | 100 mL |
| 脫纖維羊血(或兔血) | 10 mL |
制法：將滅菌后的營養(yǎng)瓊脂加熱溶化，涼至55℃左右，用無菌方法將10 mL脫纖維血加入后搖勻，傾注平皿置冰箱備用。
G11
甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基成分：
| 蛋白胨 | 10 g |
| 牛肉膏 | 5 g |
| 氯化鈉 | 5 g |
| 甘露醇 | 10 g |
| 0.2％溴麝香草酚藍溶液 | 12 mL |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
制法：將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加到蒸餾水中，加熱溶解，調pH至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚藍混勻后，分裝試管，115℃滅菌20 min備用。
G12 葡萄糖
肉湯成分：
| 蛋白胨 | 10g |
| 牛肉膏 | 5g |
| 氯化鈉 | 5g |
| 葡萄糖 | 10g |
蒸餾水 | 1 000mL |
制法：上述成分溶于蒸餾水中，調pH至7.2～7.4，加熱溶解，分裝試管，121℃滅菌15min后備用。
G13
兔血漿制法：取滅菌3.8％檸檬酸鈉1份，兔全血4份，混勻靜置，3 000 r/min離心5 min，取上清，棄血球。
G14
沙氏瓊脂培養(yǎng)基
| 蛋白胨 | 10 g |
| 葡萄糖 | 40 g |
| 瓊脂 | 20 g |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
用700 mL蒸餾水將瓊脂溶解，300 mL蒸餾水將葡萄糖與蛋白胨溶解，混合上述兩部分，搖勻后分裝，115℃滅菌15 min，即得。使用前，用過濾除菌方法加入0.1g/L的氯霉素或者0.03g/L的鏈霉素。
定性試驗采用沙氏培養(yǎng)液，即除不加瓊脂外其他成分與制法同上。
G15 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液
| 蛋白胨 | 10 g |
| 氯化鈉 | 5 g |
| 牛肉膏 | 3 g |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
調節(jié)pH使滅菌后為7.2～7.4，分裝，115℃滅菌30 min，即得。
G16
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基
| 蛋白胨 | 10 g |
| 葡萄糖 | 5 g |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
調節(jié)pH至7.0～7.2，加2％溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL，115℃ 滅菌30 min，即得。
G17
革蘭氏染色液結晶紫染色液：
| 結晶紫 | 1 g |
| 95％乙醇 | 20 mL |
| 1％草酸銨水溶液 | 80 mL |
將結晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。
革蘭氏碘液：
| 碘 | 1 g |
| 碘化鉀 | 2 g |
| 蒸餾水 | 300 mL |
脫色劑
95％乙醇
復染液：
(1)沙黃復染液：
| 沙黃 | 0.25 g |
| 95％乙醇 | 10 mL |
| 蒸餾水 | 90 mL |
將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。
(2)稀石炭酸復紅液
稱取堿性復紅10g，研細，加95％乙醇100mL，放置過夜，濾紙過濾。取該液10mL，加5％石炭酸水溶液90mL混合，即為石炭酸復紅液。再取此液10mL，加水90mL，即為稀石炭酸復紅液。
G18 0.03 mol/L
磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.2）成分：
| 磷酸氫二鈉 | 2.83 g |
| 磷酸二氫鉀 | 1.36 g |
| 蒸餾水 | 1 000 mL |
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